بررسی کارایی تکنیک تکثیر دایره ای چرخان برای تشخیص سریع قارچ کلادوفیالوفورا کاریونی و کلادوفیالوفورا یگرزی

چکیده زمینه و هدف: روند مطالعات اپیدمیولوژیک نشان می دهد که نه تنها بیماری های قارچی به طور قابل چشم گیری به خصوص در بیماران با نقص سیستم ایمنی در حال افزایش است، بلکه کاهش حساسیت عوامل قارچی به داروهای ضد قارچی نیز در حال افزایش می باشد. بنابراین تشخیص سریع و زود هنگام در حد گونه برای انتخاب داروی مناسب و مدیریت بالینی ضروری است. با این وجود روش های استاندارد تشخیصی وقت گیر، هزینه بر و از حساسیت کمی برخوردار می باشند لذا برای فایق آمدن بر هر کدام از مشکل های ذکر شده، ابزارهایی مبتنی بر pcr توسعه یافته اند. در این مطالعه از روشی که علی رغم سرعت بالا از حساسیت بالایی برخوردار بوده به نام تکنیک تکثیر دایره ای چرخان برای تشخیص دقیق تر و صحیح تر دو گونه قارچی کلادوفیالوفورا کاریونی و کلادوفیالوفورا یگرزی استفاده شد. روش بررسی: در این بررسی به طور اختصاصی از ناحیه ی رونویسی داخلی (its rdna) از مجموعه ی ژنی dna های ریبوزومی جنس کلادوفیالوفورا که قبلا تعیین توالی شده بودند، استفاده گردید و پروب های اختصاصی بر اساس تفاوت تنها در یک نوکلئوتید از ناحیه ی its rdna برای قارچ های کلادوفیالوفورا کاریونی و کلادوفیالوفورا یگرزی طراحی گردید. پروب ها در اصل توالی مکمل هدف منتهی به جایگاه لینکر می باشد که پس از هیبریداسیون با dna به شکل یک مولکول بسته در آمده، با اتصال به هدف و تکثیر در شرایط تک دمایی مورد ارزیابی قرارگرفت. یافته ها: نتایج این تحقیق یک تکثیر dna کاملا موفق را بدون نتایج مثبت و منفی کاذب و تشخیص در حد گونه نشان داد. محصول نتایجrca در ژل آگارز 5/1 درصد به صورت نردبانی نشان داده شد و واکنش مذکور در جهت تکثیر dnaی هدف به طور اختصاصی در اتصال با پروب در کمترین زمان نسبت به روش های متداول تایید گردید. نتیجه گیری: نتایج نشان دهنده ی قدرت و دقت این تکنیک در شناسایی عوامل بیماری زای قارچی در حد گونه با سرعت و اختصاصیت بسیار بالا در مقایسه با روش های شناسایی قدیمی می باشد و این تکنیک می تواند کابرد فراوانی در کلیه ی آزمایشگاه های تشخیصی داشته باشد بنابراینrca تفاوت بسیار چشمگیری را با دیگر تکنیک های وابسته به دما بر پایه ی dna برخوردار می باشد.